Authors: T Bergan Ø Olsvik
Publish Date: 1980/05/01
Volume: 8, Issue: 3, Pages: S226-S233
Abstract
Das hitzelabile Enterotoxin LTToxin ausEscherichia coli konnte in Trypticase Soy Broth mit Zusatz von 02 HefeZellenextrakt über 12 Stunden optimal und quantitativ produziert werden Die Behandlung der Zellen mit PolymyxinB erhöhte die Ausbeute an LTToxin Nach Anreicherung des Toxins mit Ammoniumsulfat konnte das LTToxinDialysat mittels Gelchromatographie mit AcA34 Ultrogel von anderen Proteinen befriedigend abgetrennt werden Als Eluent wurde 015 mol/l TrisHClPuffer mit stufenlos steigendem pHWert benützt Die Reinheit des Präparates wurde mittels Gelelektrophorese festgestellt Die Anwesenheit des LTToxins in einer einzigen Fraktion wurde in vitro durch die Aktivitätsbestimmung im Rattendarm nachgewiesen durch die Ansammlung von Flüssigkeit und Quantifizierung von cAMP in Darmflüssigkeit Die Reproduzierbarkeit der LTToxinFraktion wurde mit einem spezifischen Radioimmunassay RIA und einem enzymgebundenen ImmunosorbentAnalyse ELISA gesichert Die LTFraktion hatte ein Molekulargewicht von 72 000 Dalton Es wurden zwei Unterfraktionen des Toxins mit einem Molekulargewicht von 30 000 bzw 40 000 Dalton gefundenHeat labile enterotoxin LT toxin ofEscherichia coli could be produced optimally and quantitatively in a trypticase soy broth with 02 yeast extract after 12 hours Treatment of the cells with polymyxin B increased the yield of LT toxin After concentration by ammonium sulphate precipitation the LT toxin fraction was separated successfully from other proteins by Ultrogel AcA34 gel exclusion chromatography A 015 mol/l TrisHCl buffer with gradually increasing pH was used as eluent Purity was determined by gel electrophoresis The presence of LT toxin in one isolated fraction was demonstrated in vitro by assaying activity in the intestines of rats by collection of liquid and quantification of cAMP in intestinal fluid The reproducibility of the LT fraction was ascertained by a specific radioimmunoassay RIA and by an enzymelinked immunosorbent assay ELISA The LT fraction had a molecular weight of 72000 dalton Two subunits of the toxin with molecular weights of 30000 and 40000 dalton respectively were found
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